Efecto de los retinoides en la diferenciación del trofoblasto humano en cultivo / Effect of retinoids on the differentiation of human trophoblast culture

Objetivo: El presente estudio analiza el efecto de diferentes retinoides sobre la función y diferenciación celular del trofoblasto humano en cultivo. Material y métodos: Se realizó un estudio experimental in vitro, en donde se utilizaron vellosidades coriónicas y células de citotrofoblasto obtenidas de placentas de término de embarazos normales, que fueron cultivadas y estimuladas con concentraciones fisiológicas diferenciales de retinol (ROL), ácido 9-cis retinoico (CRET) y ácido all-trans retinoico (TRET). Se analizaron los cambios en la actividad de la metaloproteinasa-9 (MMP-9) y la metaloproteinasa-2 (MMP-2), además de documentar las condiciones óptimas para el cultivo. En una segunda fase, se estimularon células de citotrofoblasto (CTB) aisladas y se documentaron los cambios morfológicos de formación de sincicio in vitro al ser estimulados con los retinoides mencionados. Resultados: Los explantes de placenta respondieron en forma dosis dependiente, en la actividad de MMP-2 y MMP-9 cuando fueron incubados en presencia de ROL y en menor proporción cuando se incubaron con CRET y TRET. El CTB aislado y estimulado con ROL y CRET formó sincicio en un lapso de 48 horas, en tanto que los estimulados con TRET lo hicieron hasta el 4o. día de incubación. Conclusiones: La placenta y el trofoblasto aislado responden a los diferentes retinoides. La respuesta del CTB al ROL indica que el CTB cuenta con la maquinaria metabólica para transformar el retinol en CRET y TRET que tienen actividad biológica. El efecto de estos compuestos se pudiera expresar en la función de implantación y en la placenta en desarrollo.

Objective: In the current study we investigate the effect of different retinoids on the function and cellular differentiation of human cytotrophoblast (CTB) cells in culture. Material and Methods: Experimental in vitro study that analyzed explants of placenta from term pregnancy were cultured and stimulated with different physiological concentrations of retinol (ROL), 9-cis retinoic acid (CRET) and all-trans retinoic acid (TRET). The optimal conditions of CTB culture and changes in metalloproteinase-9 (MMP9) and metalloproteinase-2 (MMP2) secretion stimulated by retinoids were analyzed by zymography. Isolated CTB cells were stimulated with retinoids and morphological changes of in vitro syncytio formation were observed by light microscopy. Results: The explants of placenta had a dose-dependent increment in the activity of MMP-2 and MMP-9 when they were incubated in presence of ROL and in less proportion when they were incubated with CRET and TRET. For isolated CTB cells, CRET stimulates the differentiation to syncytio within 48 h of incubation, whereas in the absence of TRET differentiation started after the fourth day incubation. Conclusions: The placenta and isolated CTB cells have the capacity to respond to ROL, this fact suggest the presence of a metabolic pathway necessary to transform retinol to the biological active retinoids like CRET and TRET. The effect of these retinoids might be expressed in the function of implantation and developing placenta.

Desarrollo de un modelo experimental para la caracterización de la respuesta funcional del corioamnios humano

Objetivo: Este estudio fue diseñado para validar y caracterizar un modelo de cultivo de membranas corioamnióticas (MC) humanas que permita mantenerlas íntegras, viables y reproducir su capacidad de respuesta como tejido, que separa al compartimiento materno-fetal ante diversos estímulos asociados al proceso infeccioso. Material y métodos: Se utilizaron MC de mujeres con 37-40 semanas de gestación, sin trabajo de parto activo, ni señales clínicas y/o microbiológicas de infección cervicovaginal. Las MC fueron sujetadas a una placa de cultivo tipo transwell, que permitió la formación de dos compartimentos independientes delimitados por la membranas que se mantuvieron en cultivo 96 h, se evaluó la integridad estructural mediante resistencia eléctrica transepitelial y análisis histológico. La funcionalidad se midió estimulando de manera independiente o cunjunta amnios y/o corion con 500 ng/mL de lipopolisacárido o 5 ng/mL de IL-1β y cuantificando la secreción de TNFα por ELISA y de Metaloproteasa-9 (MMP-9) por zimografía, respectivamente. Resultados: Las diferentes poblaciones celulares de las MC se mantuvieron metabólicamente viables en el cultivo; los parámetros de integridad indicaron que no presentan cambios morfo-estructurales significativos. El estímulo con IL-1β induce secreción diferencial de MMP-9, que en corion alcanzó su máximo a la 4 h y en amnios a las 24 h. La estimulación selectiva con lipopolisacárido indujo la síntesis diferencial de TNFα, siendo el corion el principal productor con aproximadamente 60%. Conclusiones: El sistema de cultivo de MC propuesto, permite estudiar cuantitativa y cualitativamente la contribución de las distintas poblaciones celulares del corioamnios en la respuesta ante el estímulo diferencial con agentes inmunológico-infecciosos.

Objective: This study was designed to validate and characterize a culture model of human choriamniotic membranes (HCM) that keeps their viability, integrity and capacity to reproduce a response to several stimulus associated to an infectious process, as the tissue that separates the fetal and maternal compartment. Material and methods: We use HCM obtained after delivery by elective cesarean section. Women with 37-40 weeks of gestation without evidence of active labor or presence of clinical an microbiological signs of intrauterine/vaginal infection. The membranes were mounted in transwell devices, allowing testing two independent compartments (chorion and amnion) by physically separating the upper and lower chambers. 500 ng/mL of lipopolysaccharide was added to amniotic or chorionic surface and secretions of TNFα was measured in both compartments by specific enzyme-linked immunosorbent assays and Metalloproteinase-9 (MMP-9) secretions after stimulation with 5 ng/mL of IL-1β. Results: The viability test showed that the different cellular populations of the HCM keep their metabolic viability along 96 h of culture. The integrity parameters showed that the stay without morphologic and structural changes. Functional markers showed that membranes responded differentially to IL-1β stimulus; production of MMP-9 in chorion reached its maximum value at 4 h, while amnion reached it at 24 h. The selective stimulation of chorioamnion with lipopolysaccharide induced a differential synthesis of TNFα; the chorion was the principal producer with approximately 60% of total TNFα. Conclusions: The experimental model allows to study qualitatively and quantitatively the contribution of different cellular regions of the HCM, and its response to differential stimulation with immunologic agents.

Inducción de la síntesis de óxido nítrico en células mononucleares en cultivo utilizando líquido peritoneal de mujeres con endometriosis, en relación al porcentaje de linfocitos T y células NK identificado en dicho ambiente / Induction of nitric oxide synthesis in mononuclear cells with peritoneal fluid relatin to T-lymphocyte and NK cells in patients with endometriosis

A pesar de que la endometriosis representa un problema de salud reproductiva de gran importancia por ser una de las afecciones ginecológicas benignas más comunes, aún se desconoce su etiopatogenia. La hipótesis más aceptada es la de John Sampson la cual propone que células y tejido endometrial provenientes del fujo menstrual durante la descamación uterina llegan al peritoneo a través de tubas por contraflujo bajo condiciones específicas del microambiente peritoneal, son capaces de implantarse y proliferar en forma ectópica. Se ha documentado que los macrófagos se encuentran aumentados en cuanto al porcentaje y grado de activación en ambiente peritoneal de mujeres con endometriosis. Se sabe que la activación de este grupo celular conduce a mayor síntesis de diversas moléculas que se asocian con el padecimiento. El objetivo de este estudio fue evaluar la asociación entre la capacidad de inducción de síntesis de óxido nítrico (NO) por parte del líquido peritoneal, el porcentaje de linfocitos T cooperadores y células NK presentes en ambiente peritoneal de mujeres con diversos estadios de endometriosis comparado con mujeres sanas fértiles. Además se buscó correlacionar la concentración de TNF-a identificado en el líquido peritoneal en ambos grupos de mujeres con la inducción de síntesis NO llevada. Material y métodos: se estudió grupo de mujeres con endometriosis (MEN) provenientes del Instituto Nacional de Perinatología, el grupo testigo fueron pacientes que acudieron a la Clínica de Planificación Familiar de la Unidad Regional del Noreste (Culiacán, Sin.) para que se realizara OTB (grupo MSF). Se realizó inducción de síntesis de NO en linfocitos estimulados con líquido peritoneal de MEN y MSF para analizar los linfocitos T cooperadores y NK, además, se determinó el TNF-a del líquido peritoneal. Resultados: se observó la capacidad del líquido peritoneal para inducir la síntesis de óxido nítrico por parte de linfocitos en cultivo es mayor con respecto a la observada en mujeres sanas. Conclusiones: se ha descrito recientemente que NO es un poderoso inhibidor de actividad efectora citotóxica asociada a respuesta inmunológica sobre linfocitos T cooperadores de tipo TH-1 que promueven actividad citotóxica sobre diversas estirpes celulares, al parecer el NO inhibe la síntesis de INF-a que es un potente inductor de proliferación y actividad citotóxica de células NK, linfocitos T citotóxicos y T cooperadores

Factor de necrosis tumoral-alfa e interleucina-1 ß en los comportamientos intravascular materno, fetal y retroplacentario en parto a término y pretérmino / Tumor necrosis factor-alpha and interleukin beta at maternal, fetal maternal intravascular compartments in term and preterm outcome

El nacimiento prematuro del neonato representa más de 80 por ciento de muertes perinatales, no atribuibles a malformaciones congénitas. A la fecha se desconocen las causas que originan el desencadenamiento de trabajo de parto pretérmino como a término. Evidencias experimentales involucran diversas citocinas inflamatorias en el inicio y/o mantenimiento del evento. El objetivo del trabajo fue determinar la concentración de TNF-alfa e IL-1beta en los compartimentos vasculares retroplacentario, fetal y materno en mujeres con embarazos a término y pretérmino que presenten trabajo de parto, y en mujeres con embarazos a término sin trabajo de parto. La determinación de las citocinas TNF-alfa e IL-1beta, se llevó a cabo mediante ensayos inmunoenzimáticos comerciales. Los resultados obtenidos de las citocinas aquí estudiadas, no mostraron diferencia estadística alguna (prueba t) al comparar los diferentes compartimentos intra e intergrupo. Sin embargo, la concentración de TNF-alfa muestra una tendencia a encontrarse en mayor proporción el ambiente fetal y retroplacentario, en los grupos con trabajo de parto (a término y pretérmino), comparada con el valor del grupo a término sin trabajo de parto. Del mismo modo, la concentración de IL-1beta mostró una tendencia de mayor concentración en los grupos de mujeres con trabajo de parto (a término y pretérmino), pero sólo en el compartimento retroplacentario. Las tendencias encontradas nos permiten proponer al compartimento retroplacentario y fetal, como los sitios blanco donde se sintetiza TNF-alfa e IL-1beta. Asimismo, la observación de la compartamentalización de ambas citocinas, parece indicar la existencia de un gradiente de síntesis que identifica al feto como productor inicial de TNF-alfa.

Apoptosis en trofoblasto de pacientes con aborto espontáneo recurrente de causa no identificada / Apoptosis in trophoblast of patients with recurrent spontaneous abortion of non identified cause

El aborto espontáneo recurrente de causa no identificada o idiopático es un importante problema de salud reproductiva. En este trabajo se ha iniciado el estudio de uno de los mecanismos que podrían mediar en esta patología del embarazo humano, La hipótesis general que se propone, es que en los casos de pacientes con aborto espontáneo recurrente de causa no identificada (AER), existen fenómenos en el entorno materno/feto/placentario que se manifiestan en daño en la funcionalidad y/o vitalidad del tejido placentario. La hipótesis planteada fue consistente con el hallazgo de activación masiva de muerte celular programada en todos los casos con AER estudiados en este trabajo.

Factor de Necrosis Tumoral-alfa e Interleucina-1 beta en los compartimentos intravascular materno, fetal y retroplacentario en parto a término y pretérmino / Tumor Necros Factor-alpha and interleukin-1 at maternal, fetal and fetal-maternal intravascular compartments in term and preterm outcome

El nacimiento prematuro del neonato tiene asociado más del 80 por ciento de las muertes perinatales no atribuibles a malformaciones congénita. Hasta la fecha, se desconocen las causas que originan el desencadenamiento de trabajo de parto de término y pretérmino. Evidencias experimentales involucran diversas citocinas inflamatorias en el inicio y/o mantenimiento del evento. Objetivo. Determinar la concentración de factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-Ó) e Interleucina-1 beta (IL-1ß) en los compartimentos vasculares retroplacentario, fetal y materno en mujeres con embarazos a término y pretérmino que presentaron trabajo de parto, y en mujeres con embarazos a término sin trabajo de parto. Material y métodos. La determinación de las citocinas TNF-Ó e IL-1ß se llevó a cabo mediante ensayos inmunoenzimáticos comerciales. Resultados. Los resultados obtenidos de las citocinas aquí estudiadas no mostraron diferencia estadística alguna (prueba t) al comparar los diferentes compartimentos intra e intergrupo. Sin embargo, la concentración de TNF-Ó muestra una tendencia a encontrarse en mayor concentración en el ambiente fetal y retroplacentario, en los grupos con trabajo de parto (a término y pretérmino), en comparación con el valor del grupo de embarazadas a término sin trabajo de parto. Del mismo modo, la concentración de IL-1ß mostró una tendencia de mayor concentración en los grupos de mujeres con trabajo de parto (a término y pretérmino), pero sólo en el compartimiento retroplacentario. Conclusiones. Las tendencias encontradas nos permiten proponer a los compartimentos retroplacentario y fetal como los sitios blanco donde se sintetiza TNF-Ó e IL-1ß. Asimismo, la observación de la compartamentalización de ambas citocinas parece indicar la existencia de un gradiente de síntesis que identifica al feto como productor inicial de TNF-Ó

Identificación de nexos moleculares entre infección y ruptura prematura de membranas / Identification of molecular nexus between infection and premature rupture of membranes

En este trabajo se ha caracterizado al factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) como una señal contenida en la membrana corioamniótica de casos con ruptura prematura de membranas complicada con infección y que induce la expresión y que induce la expresión de enzimas que degradan a los componentes de matriz extracelular en las membranas fetales. Esta citocina es producida normalmente por células del sistema inmune en respuesta al contacto con agentes infecciosos y su identificación constituye el establecimiento de un nexo molecular directo entre la respuesta inflamatoria y el desarrollo de ruptura prematura de membranas

Factores dietéticos y ruptura prematura de membranas: efecto de la vitamina C en la degradación de colágena en el corioamnios / Dietetic factors and premature membranes rupture: vitamin C effect on collagen degradation at amniochorion

Diferentes estudios han mostrado asociación entre la disponibilidad de vitamina C ( vit C) y el desarrollo de ruptura prematura de membranas (RPM). Sin embargo, no ha analizado el papel que desempeña la vit C en el metabolismo de la colágena en el tejido corioamniótico. En este trabajo se analizó el efecto de modulación de diferentes concentraciones de vit C en células en cultivo derivativas de amnios humano. Se utilizaron concentraciones de vit C de manera de cubrir el rango fisiológico (29.0 µg/mL). Luego de ser estimuladas, los medios de las células fueron analizados para actividad enzimática de metaloproteasas de matriz extracelular (MMP) y se cuantificó la cantidad relativa de MMP-1, MMP-2 y MMP-9 mediante inmunotransferencia, utilizando anticuerpos policlonales monoespecíficos. Tanto la actividad como la proteína en los medios de las células amnióticas, disminuyó de manera directa a la concentración de vit C, de manera que a las concentraciones más altas probadas (100 µg/mL) se obtuvo la menor actividad/cantidad de MMP. Los resultados anteriores aportan un dato hasta ahora no descrito y que permite establecer una conexión directa entre la disponibilidad de vitamina C y el aumento en la degradación de colágeno. De acuerdo a los resultados, a menor disponibilidad de vit C, mayor degradación de colágena, que debería llevar a pérdida de soporte mecánico y eventual ruptura de las membranas fetales

Transición de la forma enzimática latente a activa como un modelo de regulación de la degradación de matriz extracelular en el corioamnios durante el trabajo de parto humano / Transition from the laten to active enzymatic form asa regulation model for the degradation of choriomniotic extracelular matrix during human labor

Las metaloprotesas de matriz extracelular (MMP) son las mediadoras fisiológicas de la degradación de la colágena y su participación en la fisiopatogenia de la ruptura prematura de membranas ha sido sugerida por nuestro grupo. Con objeto de definir si algunas MMP se activan de manera coordinada con el trabajo de parto en las membranas fetales, analizamos la actividad enzimática y proteína inmunorreactiva presente en extractos de membranas obtenidas durante cesáreas, sin trabajo de parto, aunque su actividad/cantidad fue apenas detectable. En cambio los extractos de membranas fetales obtenidas durante el trabajo de parto activo, mostraron gran actividad/cantidad de ésta MMP. Con ayuda de un anticuerpo monoclonal, fue posible demostrar que la forma activa de la MMP-9 se podía encontrar sólo en las muestras con trabajo de parto. La MMP-9 y su ARN mensajero correspondiente fueron localizados por inmunohistoquímica e hibridación in situ en el epitelio amniótico, en algunos fibroblastos de la capa compacta y en células con características de trofoblasto en el corion. Se concluye que: 1. La actividad y la cantidad de la MMP-9 se incrementa de manera selectiva asociada al trabajo de parto y 2. que esta enzima es expresada por diferentes poblaciones celulares de la membrana fetal

Participación de las metaloproteasas de matriz extracelular en la ruputora prematura de membranas fetales: un modelo fisiopatogénico novedoso / Participation of metaloproteases of extracellular matrix in premature rupture of fetal membranes: a pyisiopathogenic model

Se aportan pruebas experimentales que involucran la participación de la familia de las metaloproteinasas de matriz extracelular en la génesis de la ruptura prematura de membranas. La expresión de este grupo de enzimas, que se presenta en condiciones normales durante el trabajo de parto aparecen en la RPM sin relación con la edad gestacional. Este fenómeno no se presenta como un ejemplo aislado de la participación de las metaloproteinasas en eventos ligados al trabajo de parto, ya que es bien conocida su participación en la maduración del cuello uterino que precede a la expulsión del producto, y que consiste en mecanismos semejantes a los que ahora se postulan para la maduración de las membranas fetales. La hipótesis de trabajo en condiciones patológicas, implica entoces la activación de un sistema normal en un momento inadecuado que resulta en ruptura prematura de membranas.